簡介

盡管（guǎn）存在解剖和生理上的差異，小鼠（shǔ）在研究人類肺部疾病，包括急性肺損傷（ALI）和肺纖維化方麵仍具（jù）有極高的價值。治療方法是諸（zhū）多肺（fèi）部疾病研究的（de）核心，其中口咽吸（xī）入法（OPA）已被廣泛用，但其缺點是部分（fèn）藥劑可能被吞（tūn）入胃腸道，從而導致給藥劑量的不準確；另一種是經氣管給（gěi）藥，這涉及到在深（shēn）度麻醉狀態下切開氣管直接將藥物注入到呼（hū）吸道，然而，這種操作不僅因其（qí）侵入性和造成呼吸道損傷而不可取（qǔ），還（hái）存（cún）在耗時過長（zhǎng），且操作者需要大量的訓練等問題。

1999年，Brown等人發表研究論文描述了一種小鼠肺部直接插管的方法，後續也（yě）有其他幾（jǐ）篇論文描（miáo）述了不同的小鼠（shǔ）肺部插管方（fāng）法，但這種插管的主要問題是：當插管導管接近氣管並準備插入時，導管本身會阻擋光線，從而無法看清需（xū）要插入的（de）位置（zhì）。

本文（wén）展示了如（rú）何（hé）簡單、低成本地消除這（zhè）個（gè）可視化問題，從而確保在相對少（shǎo）的培訓（xùn）或（huò）經驗下成功進行插管。

方法

準備：

1、導管（guǎn）。對於（yú）20-35 g小鼠（shǔ）的插管，我們使用（yòng）1或1.5英寸（cùn）長，20 g IV導（dǎo）管(BD Insylte, Sparks, MD或Jelco Optiva, Carlsbad, CA)。可以為每隻小鼠使（shǐ）用新的無菌導管，但導管也可以在（zài）消毒後用70%乙醇浸泡過夜重複使用（yòng）。盡管小鼠的咽部（bù）和氣（qì）管不是無菌的，但應遵循適當（dāng）的清潔程序，包括使用無菌（jun1）手套和器械。

2、光纖電纜。我們使用約70厘米長、0.5毫米粗的Edmund Optics光纜，但長（zhǎng）度不是決定性的因素。重要的是要確保纖維的邊緣是平滑的，因為在用剃刀切割電纜後，邊緣相對較銳利，很容易刺穿氣管壁。然而隻需將光纖端部放在1000粒度的砂紙（zhǐ）上，就可以非常容易地打（dǎ）磨（mó）平這個邊緣。另一端插入橡膠塞中。最簡（jiǎn）便的方法是先用18號針（zhēn）通（tōng）過橡膠塞，插（chā）入光（guāng）纖通過針孔，然後撤出針。橡膠塞（sāi）連（lián）接150瓦鹵（lǔ）素光源。重要的是要確保使用矽（guī）膠橡膠塞(或其他耐熱材料)，因為普通橡膠或軟（ruǎn）木在靠近（jìn）熱光源時可能會（huì）燃燒。

插管：

1、參見圖（tú）1和2。通過（guò）一段短（duǎn）矽橡膠管(ID≈0.8 mm×OD 4mm, Cole-Palmer, EW-96410-13)插入光纖電纜。將這個橡膠管係緊（jǐn），同時仍然允許調整光纖電纜。將矽（guī）膠管緊密地插入套管的魯爾端，固定光纖（xiān）電纜在套管內的位置。調整光纖電（diàn）纜的位（wèi）置，使其在（zài）套管（guǎn）尖端前方約（yuē）4毫米處穿過套管。

圖1.如圖所示，光纜插入矽橡膠塞中，與其相對的另一端緊綁著一小段矽橡膠管。

圖2.圖片（piàn）展示了橡膠塞與（yǔ）光源的連接，光纖的另一（yī）端穿過插管導管。左側還展示了一個簡單的支架，用於在插管過程中固定小鼠。

2、將麻醉後（hòu）的小鼠放置在垂直支架上，由其（qí）上切牙懸掛(圖（tú）3)。大多數（shù）研究者發現，當小鼠（shǔ）的腹側麵向自己時，視覺效（xiào）果最（zuì）佳（jiā）。非（fēi）常輕柔地拔出舌頭，用拇指和食指握住（zhù）。中指放在（zài）頸部和塑（sù）料支架之間。利用食指和拇指對（duì）舌頭的牽引（yǐn）開啟口腔，並用頸部後方的中指調整頭部的角度，使（shǐ）插管路徑伸直，如（rú）圖3所示。

圖3.兩個視角展示了準備插管的小（xiǎo）鼠位置

3、使用光纖電纜作為光（guāng）源和導入器，推動它通過可（kě）視化（huà）聲（shēng）帶。如果看不到聲（shēng）帶，可以通過中指作為支點，輕輕用力拉舌頭。插入後，將套管再向前推進約5 mm。然後，小（xiǎo）心不要移動套（tào）管，拔出光纖（xiān）電纜。將小鼠平躺下來，用膠帶（dài）固定（dìng）導管，並用橡皮泥(塑型黏土)支撐導管接頭，如圖4所示。

圖4。此圖展示了一隻準備通氣的已插管小（xiǎo）鼠。圍繞嘴部的膠帶有助於防止導管移動。一小塊橡皮泥(建模（mó）黏（nián）土)提供了一個便利的支撐點，用於固定（dìng）導管接頭與呼吸機的連接。

4、步（bù）驟3中的操作不容易演示（shì）或教學，因為這是一個單獨的操作。然而，通過對（duì）舌頭的牽引力和頭部後麵的支撐的微妙調整，幾乎所有嚐試（shì）這種方法的人都會很快（kuài）找到正確（què）的（de）方式來調整小鼠的位置，使聲帶可視化。

總結

本文描述的（de）方法有幾個優點（diǎn）。首先，裝（zhuāng）置簡單且價（jià）格低廉（lián）。製（zhì）作（zuò）裝置不需（xū）要任何特殊工具或昂貴的設備。在實踐（jiàn）中，對於從未嚐（cháng）試過（guò）插管的研究員、學生和技術人員來說更容（róng）易掌握。

在進行插管時，有幾個實（shí）際問題需要提及。在最初打開（kāi）小鼠口腔時，盡量輕（qīng）柔（róu）拉舌頭非常重要。如果使用無保護鉗，很容易損傷舌頭，這可能導致小鼠死亡。在首次學習如何插管時，最重要的是使用頸部後方的手指來調整頭部角（jiǎo）度，以使氣管開口的可（kě）視化。如果操作正確，對（duì）舌頭進行足夠的牽拉，很容易看到聲（shēng）帶。最初的可視化步驟通常需要最多的時間，因為一（yī）旦看到氣管開口，插入纖（xiān）維電纜和靜脈導管就相對簡單了。

總之，本（běn）文描述的插（chā）管方法製作成本低，使用簡單，可以令（lìng）大多數研究人（rén）員和實驗室技術人員在相（xiàng）對（duì）較少的經驗下快速掌（zhǎng）握（wò）小鼠插管技術。