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 來源(yuán):實驗動物那(nà)些事兒 日期:2024.05.14 

小(xiǎo)鼠(shǔ)麻醉指導原則

目的

本文是由ARC獸醫人員設(shè)計的小鼠麻醉(zuì)指導原則,旨在提供(gòng)一般建議(yì)。這並不意味著它包含(hán)了適用於小鼠的所有可能藥物組合的詳盡(jìn)列表。具體的麻(má)醉方案應根據特定情況和研究需求(qiú)與所在機構的獸醫合作製定(dìng)。

麻醉是使動物完全或部分失去(qù)感覺,伴隨或不伴隨意識喪失。動物可能需要麻醉進行手術(shù)、可能引起疼痛的非手術操作(zuò),或需要固定的非疼痛操作。在麻醉前、麻醉過(guò)程中(zhōng)和麻醉後(hòu),必須采取措施確保動物的(de)安全和麻醉的有效性。

麻醉可通過胃腸外給藥或吸入給藥(yào)的方(fāng)式進行(háng)。藥物的選擇取決於具體操作、研究目的和其他因素,如動物的年齡。對於新生小鼠,有些特別考慮下文進行了概述。如對(duì)藥物選擇有疑問(wèn),請(qǐng)谘詢(xún)所在機構的獸醫。

01、麻醉(zuì)的一般指導原則(zé)和(hé)注意事項

適(shì)應期:建議所有動(dòng)物在(zài)運輸(shū)後適(shì)應一周,以防止應激引起的反應。動(dòng)物至少需要72小時(shí)才能恢複到基本生理狀(zhuàng)態。

禁食:由於小鼠無法嘔吐,通常麻醉前無需禁食。然而(ér),如需禁食(例如為了保持體重),因小鼠(shǔ)的高代謝率,禁食(shí)時間不應超過2-3小時(shí)。請注意,切(qiē)勿限製飲水。

眼睛保護:在麻醉(zuì)狀態下,小鼠的(de)眼睛會持續睜(zhēng)開,可能導致角膜幹(gàn)燥和損傷。因此,在如下條件下,應塗抹眼膏(如Puralube® 或 Lacrilube®)來保護眼睛。

麻醉持續時間超過 5 min;

通過麵罩進行麻(má)醉。

監護:無論(lùn)使用何種麻醉劑,均應監測麻醉狀態(tài)下的小鼠,以確保心髒和呼吸功(gōng)能不被過度抑製,以及麻醉深度適當。

在沒有專(zhuān)用設備的情(qíng)況下,可以監測以下麻醉小鼠的參數:

麻醉深度:通過掐指檢查;

呼吸頻率和模式:正常未受幹(gàn)擾的呼吸率約為 180 bpm,麻(má)醉期間可接受 50% 的緩(huǎn)慢下降速率;

粘膜顏色(sè):應為粉紅色而非藍色或灰色;

體溫:可使用直腸溫度計監測體溫,體(tǐ)溫應保(bǎo)持在 36℃ 以上;

血氧飽和度(dù)和(hé)心率:可用專用的齧齒類動物(wù)脈搏式(shì)血氧儀監測血氧飽和度 (> 95%) 和心率(300-800 bpm);

如對監護或監護設備有任何問題,請與所在(zài)機構的獸醫聯係。

保溫:所有種屬在麻醉狀態下均存在低體溫的風險。小鼠由於體表麵積與體(tǐ)重比高,尤其容易受到影響。低體溫對動物會產(chǎn)生顯著的生理應激,可能延長恢複(fù)時間並有潛在致命風險。

在所有麻醉過程中提供額外的保溫措施。

補(bǔ)充熱源包括循(xún)環水毯、電熱墊和可在(zài)微波或(huò)水浴中加熱的市售產(chǎn)品(如等溫墊或凝膠加熱器)。

切勿直接將動物放在熱源(yuán)上。

如對使用或購(gòu)買額外的保溫來源有疑問,請與您所在機構的獸醫聯係。

補液:在(zài)麻醉時間較長或動物患病、老年或虛弱(ruò)的情況下,考慮腹腔或皮(pí)下(xià)注(zhù)射溫熱的液體。更(gèng)多信息請谘詢您的獸醫。

恢複:持續監測動物(wù)直至其完全恢複(fù)。

在幹淨的籠子裏,將動物放在(zài)紙巾上(不使用墊料)。這樣可以最大程度地減少氣(qì)管阻塞或肺炎的風險。

麻醉後的動物單獨放在一(yī)個籠(lóng)子裏進(jìn)行恢複。

恢複期(qī)間繼續提供額外(wài)的保溫。

當動(dòng)物能夠走動時,將其(qí)送回原籠中子,並提供飼料和水。

根據所進(jìn)行的手術,為了避(bì)免同籠夥伴啃縫線或切口處的(de)創傷,小鼠可能需要在(zài)術後階段(duàn)單獨(dú)飼養。任(rèn)何單獨飼養的(de)計劃都應包括在IACUC方案中,以(yǐ)便(biàn)進(jìn)行審查和批準。

02、麻醉藥物和程序

吸入麻醉劑: 異氟烷是首選的吸(xī)入麻醉劑。 起效快、恢複可靠。

A. 吸入麻醉可以通過滴瓶法、誘導室、麵罩或氣管插管使用精密蒸汽器進行(háng)。

i.滴瓶法:

a.請勿使小鼠直(zhí)接接觸液體吸入麻醉劑(jì)(可(kě)通過在棉花或紗布上放置(zhì)不可滲透的網格來實現)。

b. 由於無法(fǎ)控製室內的麻醉劑濃度,並且濃度可能迅速達到有毒(dú)水(shuǐ)平,因此該方法僅適用於非常短的手術,如尾部活檢、皮下腫瘤植(zhí)入或麵罩麻醉前的誘導。

ii.誘導室、麵罩和氣管插管:

a.這(zhè)些需要配備氧氣源和(hé)精密蒸發器的氣體麻醉機。一些研究單位(wèi)可能使用室內空氣(qì)而不是純氧作為氣源(yuán),這也(yě)是可接受的。

b.蒸發(fā)器必須與特定的吸入麻醉(zuì)劑(jì)兼容。

c.由於(yú)小(xiǎo)鼠(shǔ)呼吸能力較小(xiǎo),使用非循環呼吸係統。

iii. 當使用吸入性麻醉時(shí),使用(yòng)通(tōng)風(fēng)櫃或配備氣體清除係統的麻醉係統,以盡量減少職業暴露於排出氣體。

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B. 注射麻醉劑:氯胺酮(tóng)/賽拉嗪聯合(hé)使(shǐ)用是小鼠的首選注射麻醉劑。

下(xià)麵列出(chū)了其他常用的注射劑。

i. 小鼠對各種(zhǒng)麻醉藥的敏感性差異顯著。 年齡、體質、品係、健康狀況、基因調控和性別等因素都可能影響(xiǎng)麻醉敏感性。以下劑量僅為一般指導原則,基於上述因(yīn)素可能存在顯著差異。在您的方案中添加(jiā)麻醉(zuì)劑時,建議提(tí)供一個範圍,以允許根據每隻動物的特定需求進行給藥。

ii. 不建議在小鼠中進行(háng)肌肉注射(IM),因為可能導致組織刺激、跛行(háng)和自殘等並發症。

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*一個很好的初始(shǐ)方案是 100 mg/kg 氯胺酮和 7 mg/kg 塞拉嗪(qín)。

**阿替美(měi)唑(5 mg/mL)是右美托咪定(0.5 mg/mL)濃度的 10 倍。

您需要 4-6 倍於右美托咪定體積的阿替(tì)美(měi)唑(5 mg/mL)來逆轉右美托咪定。然而,阿替美唑的安(ān)全範圍非常高,因此如(rú)果逆轉非(fēi)常緊急,給予右美托咪定等體(tǐ)積的阿替美唑(zuò),可使阿替美唑的劑量增加 10 倍,這是安全的。

同樣,使用與塞拉嗪(20 mg/mL)等體積的(de)阿(ā)替美(měi)唑 (5 mg/mL) 逆轉也(yě)有效。雖(suī)然塞(sāi)拉嗪具有(yǒu)更高的濃(nóng)度(20 mg/mL),但阿替美唑(5 mg/mL)更純淨,且與α2 受體結合更緊密,因此等體積逆轉塞拉嗪也可行。

C. 注射(shè)麻醉劑的一種類型是局部麻醉劑。

i. 局麻藥通(tōng)過(guò)特異性結合神經(jīng)細胞膜上的電壓門控 Na + 通道來阻斷神經(jīng)衝動。

ii. 給(gěi)藥途徑包括粘膜(鼻、眼等)局部給藥(yào)或直接注射到組織和神經束周圍。

iii. 在疼痛刺激(如切口(kǒu))之(zhī)前給(gěi)予局部麻醉劑被認為是輔助鎮痛藥物,與阿片類和 非甾體抗炎藥(NSAID)一起使用。

iv. 由於(yú)持續時間較短(數小時),不(bú)鼓勵將局部(bù)麻醉劑作為主要鎮痛(tòng)藥物使用(yòng),

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03、對小鼠麻醉的特殊(shū)考慮(lǜ):仔鼠麻醉

目前文(wén)獻中描述了(le)幾種適用於新生齧齒動物(wù)的麻醉方法,包括(kuò)注射麻醉、吸入麻醉和(hé)低溫麻醉。 

新生齧齒動物的麻醉(zuì)會導致親代啃食後代的問題(tí)。可通過確保新(xīn)生仔鼠完全恢複後再歸還給母鼠來減少這種情況(kuàng)。其他措施包括讓幼仔接觸來自於(yú)母鼠籠(lóng)中的(de)汙染墊料,並將幼仔放在(zài)窩仔中間位(wèi)置。

低溫麻(má)醉

低溫麻醉(zuì)隻適用於(yú)7日齡以下(xià)的新生齧齒動物,並且不應用於持續時間超過30分鍾的手術。

動物不應直接置於冰(bīng)上(在動物和底層冰浴之間使用乳膠手套或其他物質)。

當足部反射消失時,動物(wù)已達到(dào)適(shì)當的麻醉水平。

手術過程(chéng)中請勿使用白熾燈,因(yīn)為(wéi)它會使手術區域變(biàn)熱,導致動物從手術麻醉(zuì)狀態中蘇醒。

麻醉後(hòu),動物應緩慢複溫(wēn)。快速升溫可能會導致(zhì)組織損傷。可(kě)使用循環水毯、加熱(rè)墊 (40℃) 或(huò)培養箱 (33℃) 中給動物重新升溫。

幼仔能夠在無直接物理刺激的情況(kuàng)下移動後,可將其歸還給母鼠。

吸(xī)入麻醉(zuì)

新生齧齒動物(wù)可能比成年齧(niè)齒動物需要更長的吸入麻醉誘導(dǎo)時間。

在麻醉盒中進行(háng)誘導通(tōng)常需 5% 異氟烷(wán),維持(麻醉誘導盒或鼻錐)需 1-2%(流速 = 0.3-0.6 L/min)。

注射麻醉

氯(lǜ)胺酮/塞拉嗪是 7 日齡以上小鼠(shǔ)的推薦注射麻醉劑:通過 27g 針頭 IP 注射 50-150 mg/kg 氯胺酮和 5-10 mg/kg 塞拉嗪(最大體積(jī) = 0.5 mL)。

對於7日齡以上的小鼠,推薦使用氯胺酮(tóng)/塞拉嗪作為注射(shè)麻醉劑:使用27g針頭腹腔(qiāng)注射(shè)50-150 mg/kg氯胺酮和5-10 mg/kg塞拉嗪(最(zuì)大體積=0.5 ml)。

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