C57BL/6小鼠是使用（yòng）最廣（guǎng）泛的近交係小鼠（shǔ），被應用於免疫學、神經（jīng）生物學、腫瘤學等生命科學研（yán）究，同時也是基因（yīn）工程小鼠的最主要背景品係。在（zài）免疫學研究中（zhōng），從（cóng）C57BL/6小鼠脾髒中獲取免疫（yì）細胞（bāo）是一種常規（guī）操作。

請想象以下場景：正在取小（xiǎo）鼠脾髒的學生發現脾髒出現（xiàn）了黑色斑（bān）點（diǎn）（圖1），“老（lǎo）師，大事不好，我們的小鼠怕是被感染了。你看，小鼠的脾髒壞死了，一端已經變黑了。”估計很多動物設施管理者都會被驚出一身冷汗。

筆者查閱了相關文獻並做了初步實驗，確定該現象是（shì）非白化小鼠自身的色素（sù）在脾髒沉積的自然現象且與毛發生長（zhǎng）周期性有關，對基礎（chǔ）免疫學實驗沒有影響。

01、PART

C57BL/6小鼠脾髒出現黑色斑點的現象，首次報道要追（zhuī）溯到1967年，Weissman等人在上免疫學實驗課時發現C57BL/Ka和C57BL/6小鼠的一些脾髒上有黑色的斑點。C57BL/Ka×Balb/c F1代小（xiǎo）鼠的脾髒上也發現了黑色斑點，但是Balb/c小（xiǎo）鼠（白化小鼠）脾髒無黑色（sè）斑點。初步研究發現該現象沒有明顯的孟德爾遺傳規律。隨後的實驗發現脾髒（zāng）中的黑色（sè）斑點（diǎn）不能被普魯（lǔ）氏藍染色，排除了含鐵的色素。

另外可以用DOPA氧化酶染色，可以被過氧（yǎng）化氫漂白，說明（míng）脾髒黑色斑點中含有真黑色素（melanin）[1]。該現象加幾個實驗組成的文章發表在Nature（發頂刊這麽容易（yì）嗎？有沒有被驚到）。文中Weissman等人討論了（le）這（zhè）些黑色素細胞可能是（shì）從其（qí）它組織遷移而（ér）來。

02、PART

1977年（nián），Auriol C等人（rén）在對（duì）C57BL/10接種支原體的實驗中也發現了這種現象，並排除了支原體感染的影（yǐng）響[2]。1989年，Veninga, T.S等人（rén）動用了電鏡等多種觀察手段，發現是脾髒紅髓中的巨噬細胞吞噬（shì）了色（sè）素（sù）顆粒[5]（圖2）。

1995年，van der Heijden等人研究進一步認（rèn）為脾髒黑色斑點主要是由真黑色素（melanin）造成的，脂褐質（lipofuscin）或（huò）血（xuè）鐵黃素（sù）（haemosiderin）不是造成該（gāi）現象（xiàng）的主要色素。

至此，對小鼠脾髒黑色斑點的研究主要集中在切片鏡檢等光（guāng）學形態學觀察（chá）手段[4]。

03、PART

更深入的研究（jiū）出現在2005年，從事色素研究的Przemyslaw M. Plonka等（děng）人首次（cì）使用電子順磁共振波譜（EPR）證明了C57BL/6脾髒黑斑含有真黑色素（melanin）。並且還發現（xiàn）脾（pí）髒（zāng）黑斑現象與毛發周期之間的（de）相關性（圖3），他們發現在小鼠毛發周期的退化期，存在多達50-80%的黑色素沉著脾髒，而在處（chù）於毛（máo）發周期深層休止期的小鼠中，黑色素變性脾髒的百分比約為15%。EPR觀察到的脾髒真黑色素與（yǔ）皮膚中發現的色素（毛囊（náng）黑色素細胞和發幹）不（bú）同。與皮膚色（sè）素相比，其功率飽和度和線寬揭示了順磁性中心的異質性，這表明色素存（cún）在部分降解[6]。

04、PART

2009年Przemyslaw M. Plonka已經成為通訊作者，他們實驗室延續了前麵的研究，發現與年（nián）輕C57BL/6小鼠相比，老年C57BL/6小鼠沒有表（biǎo）現出肉眼可見的脾髒黑斑。認為小鼠的脾（pí）髒黑色素沉著（zhe）現象一（yī）定程度上與毛發周期同步的皮（pí）膚黑色素沉著有關，並且脾髒黑色素在小鼠（shǔ）一（yī）生中逐（zhú）漸降解（jiě）。因此小鼠脾髒黑色素沉著可能是一種研究體內衰老和黑色素（sù）降解（jiě）機（jī）製的獨特現象[7]。

2015年Przemyslaw M. Plonka實驗室繼續發現脾髒黑色斑點也出（chū）現在129/SvJ野鼠色（agouti）小鼠上（圖4）。由於野鼠色agouti（agouti）表型是小型野生哺乳動物（如齧齒動物）的基本表型，對它們（men）來說是一種偽裝色。這說明與毛發色素沉著（zhe）相關的脾髒黑色斑點現象並不是一種僅在實驗室近交係小鼠（shǔ）中觀（guān）察到的奇異現（xiàn）象。這一現（xiàn）象也可能（néng）出現在野外（wài）動（dòng）物上[3]。

有關小（xiǎo）鼠毛色（sè）更詳盡深入的內容可（kě）參閱本公眾號前（qián）文《小鼠的毛色是如何形成的？》及《小鼠毛色變化的分子成因》。

筆者實驗室經常做小鼠胚胎移植實驗（yàn），需要（yào）用到大量C57BL/6（黑色）小鼠和ICR（白化）小鼠。經過一段時間的觀察，發現（xiàn）不同批次C57BL/6小鼠脾髒黑斑出現的平均概率在15%左右，無明顯遺（yí）傳（chuán）規律。ICR小鼠脾髒無黑斑現（xiàn）象。

筆者通過HE染色切片，發現與正常脾髒相比，黑斑脾髒的紅髓、白髓、生發中（zhōng）心等結構完整，數量正常，無炎症和壞死現象（圖5）。黑（hēi）斑脾髒（zāng）中紅髓部分散落著明顯（xiǎn）的黑色細胞。六胺銀染色結果顯示黑色斑塊形狀、大小完全不一致，可以排除微生物感染（圖5），與Veninga, T.S等人的實驗結果類似（sì）[5]。

筆者還檢測了黑斑脾髒的C57BL/6小鼠的血常規數據，並使（shǐ）用流式（shì）細胞術檢測CD4+和（hé）CD8+陽性T細胞的比例，發現與無黑（hēi）斑脾髒小鼠相（xiàng）比（bǐ）無（wú）顯著差別（結果不顯示）。

小（xiǎo）鼠脾髒黑色斑點這種現象（xiàng）貌似沒有太大用處，目前可以確定小鼠基礎生理指標和一些基礎免（miǎn）疫學指標正常，對免疫學研究應沒有影響。但是否可以作為人類色素沉著症的模型需要進一（yī）步研究考（kǎo）察。

參考文獻：

[1] Weissman, I., Genetic and histochemical studies on mouse spleen black spots. Nature, 1967. 215(5098): p. 315.

[2] Auriol C, Hill,., H. Georgis, and J. Breaden, Pigment in the spleen of C57BL/10ScSn and related mice. Experientia, 1977. 33(7): p. 954-5.

[3] Michalczyk-Wetula, D., J. Wieczorek, and P.M. Plonka, Splenic melanosis in agouti and black mice. Acta Biochimica Polonica, 2015. 62(3): p. 457-463.

[4] van der Heijden, A., et al., Spleen pigmentation in young C57BL mice is caused by accumulation of melanin. Lab Anim, 1995. 29(4): p. 459-63.

[5] Veninga, T.S., R.A. Wieringa, and H. Morse, Pigmented spleens in C57BL mice. Lab Anim, 1989. 23(1): p. 16-20.

[6] Plonka, P.M., et al., Splenic eumelanin differs from hair eumelanin in C57BL/6 mice. Acta Biochimica Polonica, 2005. 52(2): p. 433-441.

[7] Michalczyk, D., et al., Extradermal melanin transfer? Lack of macroscopic spleen melanization in old C57BL/6 mice with de-synchronized hair cycle. Acta Biochimica Polonica, 2009. 56(2): p. 343-353.